概述
本试剂盒是以活化的生物素与抗体或蛋白上的伯胺交联,形成稳定的酰胺键,实现生物素与抗体或蛋白质的偶联反应。
特点
- 1. 可偶联1-10mg的抗体,最佳的偶联量为1mg。其他蛋白质需根据抗体的分子量(约160 kDa)估算偶联量,抗体分子量是蛋白质分子量的多少倍,则能偶联多少倍的蛋白量,如蛋白质的分子量是80 kDa,抗体分子量是其2倍,则能偶联2mg的该蛋白。
- 2. 经脱盐柱离心可得到高纯度的偶联产物。
使用说明
1. 取500 μl需要偶联的抗体或蛋白加入1.5 ml离心管中。
2. 同时加入250 μl生物素偶联液和250μl溶解后的活化生物素。在旋转混悬仪上,室温缓慢反应2小时。
3. 将脱盐柱离心:1000 g,1分钟。
4. 去除脱盐柱顶部和底部的盖子,放入合适的离心管中(15ml离心管)。离心:1000 g,2分钟,除去树脂保存液。
5. 加入5倍柱体积的生物素偶联液(25 ml)平衡脱盐柱,每次平衡后离心去除偶联液:1000 g,2分钟
6. 将脱盐柱转移到新的离心管中,缓慢的将第2步的偶联产物转入树脂的中心, 离心:1000 g,8分钟。
7. 收集离心管中液体即为标记产物。
组份
活化生物素,活化生物素稀释液,生物素偶联液,脱盐柱