碧云天的Human Coagulation Factor III/Tissue Factor ELISA Kit (Human Coagulation Factor III/Tissue Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即人凝血因子III/组织因子酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Coagulation Factor III/ Tissue Factor的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。多次重复检测结果表明,最小检出量为4.5pg/ml,与人凝血因子VII、凝血因子X、凝血因子XI、凝血因子XIV,小鼠凝血因子III等均没有交叉反应,板内、板间变异系数均小于10%。
凝血过程主要由内外两种凝血机制介导。凝血因子III (Coagulation Factor III),又称组织因子(Tissue Factor)、Thromboplastin或CD142,是外在凝血途径的主要调节因子。凝血因子III是一种分子量为47kDa的跨膜糖蛋白,主要表达在血管平滑肌中,其它细胞类型,例如内皮细胞和单核细胞在受到细胞因子和生长因子刺激时也能够表达凝血因子III。当血管出现损伤时,凝血因子III则会与凝血因子受体VII结合。当二者结合后,就会形成活性凝血因子III-FVIIa复合物,该复合物能够发挥酶解作用,激活下游凝血因子,包括凝血因子IX和凝血因子X,进而导致凝血酶原转化为凝血酶,并且诱导血纤蛋白的形成。由于其凝血特性,凝血因子III在血栓形成或弥散性血管内凝血等病理条件下都具有重要作用。在动脉粥样硬化过程中,凝血因子III大量表达,并且能够促进血栓形成。除了发挥凝血作用外,凝血因子III在炎症、血管生成以及肿瘤生长和转移中也具有一定作用。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人Coagulation Factor III的浓度,其原理见图1。人Coagulation Factor III特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标准品或样品时,其中的人Coagulation Factor III会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人Coagulation Factor III抗体后,生物素化抗人Coagulation Factor III抗体与人Coagulation Factor III结合,形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin),由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合,因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液,固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人Coagulation Factor III浓度与A450值呈正比,通过绘制标准曲线,对照样品吸光度值,即可计算出样品中人Coagulation Factor III 浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒,包括标准品检测,可以进行96次检测。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
PC095-1 | 人Coagulation Factor III抗体预包被板 | 8孔×12条 |
PC095-2 | 样品分析缓冲液 | 5ml |
PC095-3 | 标准品稀释液 | 10ml |
PC095-4 | 人Coagulation Factor III标准品 | 2-4瓶 |
PC095-5 | 人Coagulation Factor III生物素化抗体 | 10ml |
PC095-6 | 辣根过氧化物酶标记Streptavidin | 10ml |
PC095-7 | 洗涤液(20X) | 30ml |
PC095-8 | TMB溶液 | 10ml |
PC095-9 | 终止液 | 5ml |
PC095-10 | 封板膜(透明) | 2张 |
PC095-11 | 封板膜(白色) | 2张 |
- | 说明书 | 1份 |
标准品4℃保存,1-2周内有效,-20℃保存6个月内有效;试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外,试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项:
由于标准品一般是冻干粉,在制备后需要严格校准,所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶,如果发现有结晶,请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性,标准品配制使用后,如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属,否则容易失效。
加样时,请注意每个样品或标准品必须更换枪头,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试,所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分,即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时,请独立使用各个试剂盒中的试剂,请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要,在加液后请轻轻晃动整个96孔板,以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行,要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔,以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。