ATP检测试剂盒

使用说明：
1. 样品测定的准备：(注意：样品裂解需在4℃或冰上操作)
对于贴壁细胞：
吸除培养液，按照6孔板每孔加入200微升裂解液的比例(即相当于细胞培养液量2毫升的1/10)加入裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分，可以使用移液器进行反复吹打或晃动培养板使裂解液充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后4℃ 12000g离心5分钟，取上清，用于后续的测定。
对于悬浮细胞：
用离心管离心沉淀细胞，弃上清，轻轻弹散细胞，按照6孔板每孔的细胞量加入200微升裂解液的比例加入裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分可以弹击离心管管底或适当Vortex使裂解液充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后4℃ 12000g离心5分钟，取上清，用于后续的测定。
对于组织样品：
按照每20毫克组织加入约100-200微升裂解液的比例加入裂解液，然后用玻璃匀浆器或其它匀浆设备进行匀浆。充分匀浆可以确保组织被完全裂解。裂解后4℃ 12000g离心5分钟，取上清，用于后续的测定。
2. 标准曲线测定的准备：
冰浴上溶解待用试剂，把ATP标准溶液用ATP检测裂解液稀释成适当的浓度梯度。具体的浓度需根据样品中ATP的浓度而定。初次检测可以检测0.1、1和10微摩尔/升这几个浓度，在后续的实验中，可以根据样品中ATP的浓度对标准品的浓度进行适当调节。
3. ATP检测工作液的配制：
按照每个样品或标准品需100微升ATP检测工作液的比例配制适当量的ATP检测工作液。把待用试剂在冰浴上溶解。取适量的ATP检测试剂，按照1:100的比例用ATP检测试剂稀释液稀释ATP检测试剂。例如50微升ATP检测试剂可以加入5微升ATP检测试剂稀释液配制成5毫升ATP检测工作液。稀释后的ATP检测试剂即为用于后续实验的ATP检测工作液。ATP检测工作液可在冰浴上暂时保存。
4. ATP浓度的测定：
a. 加100微升ATP检测工作液到检测孔或检测管内。室温放置3-5分钟，以使本底性的ATP全部被消耗掉，从而降低本底。可以一次性把10-20个检测孔或检测管分别加上100微升ATP检测工作液，从而节省时间。
b. 在检测孔或检测管内加上20微升样品或标准品，迅速用枪(微量移液器)混匀，至少间隔2秒后，用luminometer或液闪仪测定RLU值或CPM。(注：样品的体积可以自行在10-100微升范围内调节。如果样品中的ATP浓度比较低则可以加入100微升样品，如果样品中ATP浓度比较高则可以加入较小体积的样品，同时标准品也需要使用相同的体积。如果样品中ATP的浓度特别高，可以用ATP检测裂解液稀释样品后再测定。本试剂盒在加入100微升标准品时，大致在10nmol/L-10μmol/L的浓度范围内有很好的线性关系。)
c. 根据标准曲线计算出样品中ATP的浓度。
d. 为了消除样品制备时由于蛋白量的差异而造成的误差，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定样品中的蛋白浓度。然后把ATP的浓度换算成nmol/mg蛋白的形式。

常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer，即化学发光检测仪，检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说Luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的ATP检测？
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本ATP检测试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定，并且可以选择相同的测定参数，例如检测前等待时间为2秒，检测时间为10秒等。
3. 多功能酶标仪是否可以用于本试剂盒的ATP检测？
不一定。如果该多功能酶标仪具有检测化学发光的功能，即具有luminometer的功能，就可以用于本试剂盒的检测，否则就不能了。

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