谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)(Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase,GR)活性的试剂盒。谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布,可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。GSH可以清除自由基和一些有机过氧化物,或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH),而GSH可以和生色底物DTNB反应产生黄色的TNB和GSSG,并可以通过测定A412来检测TNB的生成量。适当设置应体系,前后两个反应合并起来后,GSSG/GSH过量而GR相对不足时,该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素,此时黄色的TNB生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。从而通过测定A412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。本试剂盒的具体反应原理如下:
两个反应相合并:
本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。图中可见,对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
S0055-1 | 谷胱甘肽还原酶检测缓冲液 | 50ml |
S0055-2 | 样品稀释液 | 50ml |
S0055-3 | NADPH | 5mg |
S0055-4 | 氧化型谷胱甘肽(GSSG) | 14.2mg |
S0055-5 | DTNB | 4.5mg |
S0055-6 | DMSO | 1.5ml |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存,一年有效。NADPH溶解后宜分装并-70℃保存,4℃可以保存一天,-20℃保存一周后NADPH会降解10%以上。GSSG和DTNB在配制成溶液后,适当分装后-20℃保存。
注意事项:
本试剂盒检测时涉及氧化还原反应,因此所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。如果在样品中的还原剂无法避免,例如DTT、巯基乙醇等,则这些还原剂的总浓度至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以抑制40%的酶活力。另外,硫酸钠、硫酸铵和铁氰化物都会干扰本试剂盒的测定。请尽量避免。
样品可以立即测定,也可以-70℃冻存待以后测定。
一定要严格控制反应时的温度为25℃,否则会引起较多误差。
NADPH不太稳定,要严格按照后续说明操作,谨防失活。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。