碧云天生产的BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒,即BeyoRT™ III First Strand cDNA Synthesis Kit,是一种采用了经过改造和优化的快速高效(短至10min完成反转录)、热稳定(高达55℃)、高精确度、产物超长(长达12kb)的BeyoRT™ III M-MLV反转录酶,可以用于以总RNA、mRNA等为模板反转录合成cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。
使用本试剂盒合成的第一链,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建, 尤其是逆转录所得目的基因的克隆等。
使用本试剂盒可以轻松完成长度为8 kb以下基因的反转录(参考图1),反转录的最大长度可以达到12 kb。
图1. 使用本试剂盒对总RNA反转录后,对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-12kb的cDNA可以非常高效地被反转录。
本试剂盒中的BeyoRT™ III M-MLV反转录酶热稳定性好,反转录的效率高。本产品最适反应温度为42℃,当温度达到50℃时仍具有很高活性,对于长度较短的cDNA反转录,温度达到55℃时也可获得较高产量的cDNA。高温反转录对于高GC含量RNA的反转录,能有效减少二级结构,提高反转录效率。反转录的速度快,反转录的速度快,6kb以下的cDNA反转录只需0.5h即可完成,3kb以下的cDNA反转录10min即可完成(参考图2)。
图2. BeyoRT™ III M-MLV反转录酶在不同温度反应不同时间的反转录效果。从HEK293T细胞抽提获得的总RNA 2µg,在20μl反转录体系中按照图中所示温度、时间进行反转录。反转录后取1μl反转录产物进行目的基因(2.6kb的YWHAZ基因和6.0kb的ADAR1基因)的PCR扩增和电泳。
本试剂盒提供了RNase Inhibitor,确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得良好的反转录效果。
本试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物,前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的反转录,后者适合用于任何RNA的反转录。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。
失活或抑制:80℃孵育10min可以导致本产品中的BeyoRT™ III M-MLV反转录酶失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BeyoRT™ III M-MLV反转录酶有抑制作用。
用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时,不同包装的本试剂盒足够分别进行20个、100个和500个cDNA第一链样品的合成。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7178M-1 | BeyoRT™ III M-MLV反转录酶 | 100μl |
D7178M-2 | Reaction Buffer (5X) | 0.5ml |
D7178M-3 | RNase Inhibitor (20U/μl) | 100μl |
D7178M-4 | dNTP Mix (10 mM each) | 200μl |
D7178M-5 | Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) | 100μl |
D7178M-6 | Random Hexamer Primer (0.2μg/μl) | 100μl |
D7178M-7 | DEPC-treated Water | 1.5ml |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
对于GC含量比较高的RNA的反转录,产品的使用说明中给予了特别说明,请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。