碧云天生产的BeyoRT™ II cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-),即BeyoRT™II First Strand cDNA Synthesis Kit (RNase H minus),是一种采用了经过改造和优化的BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-),用于以总RNA、mRNA等为模板反转录合成cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。
使用本试剂盒合成的第一链,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR也称定量
PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建等。
使用本试剂盒可以轻松完成长度为8 kb及以下基因的反转录(参考图1),反转录的最大长度可以超过10 kb。在采用BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-)的情况下,由于缺失了RNase H酶活性,RNA和DNA双链复合物中的RNA不会被降解,这样反转录出来的cDNA的长度就会更长,并且产量更高。
图1. 使用本试剂盒对总RNA反转录后,对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-8kb的cDNA可以非常高效地被反转录。
本试剂盒中的BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-)热稳定性高,最适反应温度为42-45℃,但当温度达到50℃时仍具有很高活性,且可获得较高产量的cDNA。
试剂盒中提供了RNase Inhibitor,确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得较好的反转录效果。
试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物,前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的反转录,后者进行反转录时不需要poly(A)尾。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。
用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时,不同包装的本试剂盒足够分别进行20个,100个及500个cDNA第一链样品的合成。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7168S-1 | BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) | 20μl |
D7168S-2 | Reaction Buffer (5X) | 0.1ml |
D7168S-3 | RNase Inhibitor (20U/μl) | 20μl |
D7168S-4 | dNTP Mix (10 mM each) | 40μl |
D7168S-5 | Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) | 20μl |
D7168S-6 | Random Hexamer Primer (0.2μg/μl) | 20μl |
D7168S-7 | DEPC-treated Water | 0.3ml |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
对于GC含量比较高的RNA的反转录,产品的使用说明中都给予了特别说明,请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。