源叶G418 硫酸盐 · 现货速达
源叶 G418 硫酸盐 S17023 完整使用指南
|
载体设计
含 neo/kanR 基因
|
→ |
细胞摄取
转染 / 感染
|
→ |
加压筛选
G418 培养 7-14 d
|
七、规格选购建议
初试 / 摸条件
做 kill curve、筛一两块 6 孔板的细胞,100 mg 装足够。
常规筛选 / 建系
同时推进 2-5 株稳转细胞系,250 mg-1 g 装更从容。
大批量 / 长期维持
细胞库、CRO 长期维持与大规模筛选,建议 5 g / 25 g 装。
八、常见问题 FAQ
|
1 |
G418 和 Geneticin 是同一个东西吗? |
是。Geneticin 是 G418 的常用商品名,二者指同一物质。源叶在售的 G418 硫酸盐 S17023(CAS 108321-42-2)即 G418 的硫酸盐形式,英文名 G418 sulfate,级别 BR、效价 600 μg/mg。
|
2 |
为什么正式筛选前一定要做 kill curve? |
不同细胞系对 G418 的敏感性可相差十倍以上(干细胞约 50-150 μg/mL,部分贴壁细胞需 400-800 μg/mL)。不做预实验会出现两种失败:浓度过高把阳性细胞一起杀光;浓度过低筛不干净、假阳性克隆大量生长。建议设置 0 / 50 / 100 / 200 / 400 / 600 / 800 / 1000 μg/mL 梯度,选择7 天内使细胞全部死亡的最低浓度作为筛选浓度。
|
3 |
G418 母液怎么配、怎么保存? |
推荐用无菌去离子水配成 100 mg/mL 母液,0.22 μm 滤膜过滤除菌后分装,-20℃ 冻存、避免反复冻融;4℃ 可短期存放,建议 1 个月内用完。切勿用含血清培养基直接溶解干粉,也不要高温灭菌。
|
4 |
效价标注 600 μg/mg 是什么意思?称量时要换算吗? |
意思是每毫克干粉中含约 600 μg 具有活性的 G418,这是氨基糖苷类抗生素的常规效价标注方式。按目标浓度配制培养基时应以标签标注效价为基准折算,否则实际活性浓度会低于计算值、导致筛选失败。
|
5 |
加压后多久能出克隆?一直没有克隆怎么办? |
通常 7-14 天可见抗性克隆。若 10 天仍无克隆,按概率排查:① kill curve 浓度定得太严;② 转染/感染效率过低(可换用 脂质体 2000 S30520 或 HP 核酸转染试剂 R43514);③ G418 母液反复冻融或培养基存放过久失效;④ 接种密度过低。建议先用未转染细胞做阳性对照验证药物活性。
|
6 |
稳转株建成后还要继续加 G418 吗? |
建议用维持浓度(约筛选浓度的 1/2)持续维持,防止无选择压力时外源片段随传代丢失、表达衰减;但正式做功能实验前建议撤药 1-2 代,避免药物本身干扰细胞状态与读值。
|
7 |
G418 能和嘌呤霉素、潮霉素 B 一起用吗? |
可以,这是双抗/多抗共筛的常规做法,但每种抗生素都要单独做 kill curve,并验证联用时的正交性(联用浓度通常低于单用)。源叶可选配套:嘌呤霉素盐酸盐 V30200、嘌呤霉素二盐酸盐 V34573、潮霉素 B 溶液 V33764、硫酸博来霉素 S17100、灭瘟素 S 盐酸盐 V30030。
|
8 |
含 G418 的培养基能存放多久? |
37℃ 培养条件下 G418 活性半衰期约 5 天,因此含药培养基建议现用现配,或2-3 天更换一次;母液则分装冻存、避免反复冻融。长时间不换液是「筛选后期克隆死亡 / 假阳性增多」的常见原因之一。
|
9 |
悬浮细胞和干细胞有什么特别注意事项? |
悬浮细胞(如 Jurkat、K562)筛选时密度不能太低,建议维持 2-5×10⁵/mL,否则大量死亡会迅速耗尽营养;iPSC / 胚胎干细胞对 G418 极为敏感,应从 50 μg/mL 起做梯度,切勿直接套用 400-600 μg/mL 的贴壁细胞方案。
|
10 |
S17023 怎么储存和运输?长期筛选要不要查支原体? |
干粉按官网标注2-8℃ 避光保存;溶解后的母液需 -20℃ 分装冻存。G418 筛选周期通常长达 2-3 周,属于支原体污染高发场景,建议在筛选启动前和建系后各检测一次,可选用 支原体检测试剂盒(PCR 法)R43810 或 支原体检测试剂盒(荧光法)R44046。
网址:https://www.sanhua-chem.com/
小艺 
